【48812】百萤讲堂之APC与抗体的组合试验计划

　　的纯化在大多数情况下要24-48小时。除了下面列出的资料外，您还需求浓度至少为2mg/ml的抗体溶液。请您在进行APC抗体组合试验之前了解怎么样去运用脱盐柱以及怎么获取吸光度光谱。

　　注2:SMCC-APC组合物很安稳(在“交流缓冲液”中，在4℃下至少可以安稳几个月)。因而，假如您需求节约一部分时刻，可以再一次进行挑选一起组合10毫克或更多的APC,并将其用于几回抗体试验(在几周内)。SMCC-APC的长时间贮存最好是作为饱满硫酸铵沉淀物。

　　留意：APC在组合前作为SAS(硫酸铵钠)沉淀物最安稳。假如将APC 以SAS沉淀物的方式贮存，则必须在运用前进行很多纯化。在用每毫升1升的“透析缓冲液”透析之前，用每毫升1升APC 的PBS进行透析2 次。

　　2.运用1.7毫克APC 润饰每毫克lgG, 包含在缓冲液交流过程中丢失的额定10%。

　　2.每毫克APC参加6μlSMCC,并进行涡旋。将反响管用铝箔包好，室温下旋转60 分钟。

　　留意：关于失利或作用较差的结合，增加或削减SMCC 相关于APC 的量，可能会有所好转。

　　2.1gG溶液浓度应为 4 mg/ml或更高，这样作用比较好。复原简直能在任何缓冲液中进行；MES 、磷酸盐和 TRIS 缓冲液(pH 规模为6至8)已被验证可以正常的运用。假如抗体浓度低于2mg/ml，则应浓缩。缓冲液交流柱上的丢失应额定增加

　　3.用DTT制造20mMlgG溶液：每毫升 IgG溶液参加20μlDTT 原液并拌和。室温下静置30分钟，无需额定拌和 (以最好可以下降半胱氨酸再氧化为胱氨酸)。

　　4.将复原的lgG 经过预平衡的“交流缓冲液”过滤柱。搜集0.25毫升的级分，测定蛋白浓度，并将含有大部分lgG 的级分聚集在一起。可以终究靠分光光度法或比色法完结。

　　1.每毫克IgG 增加1.5毫克SMCC-APC 。用铝箔包裹反响管并在室温下旋转60 分钟。留意：这些摩尔比( 每 1gG 约2个APC)作用很好。关于失利或作用欠安的结合，不同的摩尔比可能会起到必定的协助。